Почти у всех больных с осложнением после переливания несовместимой крови на высоте сенсибилизации, кроме высокого (и очень высокого) титра специфических антител, как вызвавших осложнение, так и появившихся в ответ уже на эту трансфузию, сыворотка крови приобретает свойство склеивать эритроциты почти всех доноров, т. е. вызывать «неспецифическую» агглютинацию эритроцитов, что в этот период чрезвычайно осложняет подбор крови таким больным.
Подводя итог всему сказанному о несовместимости при переливании крови вследствие изосенсибилизации реципиента, можно сделать вывод, что в этих случаях динамика титра антител различается в зависимости от сроков, характера поступления антигена и исходного состояния организма.
У больных, у которых осложнение наступает после первой же трансфузии и предыдущая сенсибилизация обусловлена лишь беременностями, большей частью имеются неполные антитела лишь одной специфичности, чаще всего анти-Rh0(D). Иногда эти антитела наблюдаются и в полной форме, чаще появляясь лишь на 4 — 7-й день после трансфузии. В это же время у некоторых больных образуются слабые неполные и полные антитела анти-rh´(С). Еще реже появляются антитела анти-rh”(Е).
В дальнейшем активность всех антител возрастает, достигая к 15 — 20-му дню наибольших показателей для каждого вида антител. В наиболее высоком титре выявляются антитела, послужившие причиной осложнения. Начиная с 20 — 25-го дня титр всех антител постепенно снижается, а впоследствии они исчезают тем раньше, чем позже появились. Лишь антитела, вызвавшие осложнение, долго (месяцы, годы) сохраняются в титре, превышающем исходное значение.
Несколько иная картина наблюдается у больных, предыдущая сенсибилизация которых была связана как с беременностями, так и с трансфузиями крови. У большинства из них осложнение обусловлено несовместимостью по отношению к двум антигенам, т. е. с самого начала имеется два антитела, чаще всего анти-Rh0(D) и анти- rh´(C). Эти антитела наблюдаются в неполной и довольно часто в полной форме.
Начальный титр их значительно выше, чем у больных описанной выше группы, и также наблюдается большее его повышение. На 7-й день появляются другие антитела. Затем все антитела также постепенно ослабевают и впоследствии исчезают в порядке, обратном их появлению. Но антитела, послулившие причиной осложнения, также долго сохраняются в крови больных в высоком титре.
Третий тип изменений наблюдается у больных с повышенной склонностью к сенсибилизации (чаще всего у страдающих язвенной болезнью). В таких случаях осложнение развивается большей частью на фоне антител одной специфичности, исходный титр которых бывает невелик.
Однако в дальнейшем титр повышается очень резко, достигая исключительно высоких цифр (1:1 000 000 и более). Снижается он столь же резко. При этом иногда наблюдается лишь кратковременное появление других антител.
Остановившись на различиях в серологических сдвигах у больных разных групп, в частности на зависимости их от характера поступления антигена, следует отметить, что все эти изменения соответствуют общим биологическим закономерностям, выражающимся прежде всего в том, что титр антител, послуживших причиной осложнения, достигает максимума к 15 — 20-му дню.
В то же время по мере нарастания сенсибилизации у больных появляются новые антитела против других антигенов, находящихся в перелитой крови. Титр их также возрастает, но значительно отстает от титра антител, послуживших причиной осложнения. Высокий титр антител сохраняется приблизительно до 25-го дня от начала конфликта, после чего постепенно ослабевает.
Антитела, присоединившиеся в течение заболевания, т. е. стимулированные последней трансфузией, исчезают из крови тем раньше, чем позже они появились. К концу 2-го месяца остаются только те антитела, которые послужили причиной осложнения в титре, превышающем исходное значение. Эти антитела долго сохраняются в крови больных.
Таким образом, диагностика осложнений, вызванных переливанием несовместимой крови, базируется на комплексе сведений:
на анамнестических данных, клинической Картине заболевания, определении антигенной принадлежности крови больного и донора и показателях специфичности и титра антител в крови больного, полученных при динамическом наблюдении.
Результаты тщательного динамического исследования крови в совокупности с другими сведениями позволяют установить правильный диагноз, а следовательно, провести необходимое лечение.
«Групповые системы крови человека и
гемотрансфузионные осложнения», М.А.Умнова
Агглютинация крови — это склеивание и оседание в виде осадка эритроцитов, бактерий и других клеток, которые несут антигены.
Процесс происходит под воздействием агглютининов, которые являются специфическими веществами. В роли этих веществ выступают лектины или антитела.
Возможные виды агглютинации при определении группы крови
Агглютинация бывает специфической и неспецифической. В первом случае реакция происходит с участием трех компонентов:
- антигенов;
- антител;
- электролитов (применяется изотонический раствор).
Используются все возможные виды агглютинации при определении группы крови, однако это не единственный случай.
С какой целью используется?
Реакция агглютинации крови применяется для того, чтобы выявить возбудителя инфекционного заболевания. При этом он оседает, и его легко обнаружить в осадке. Данный процесс используется, как уже упоминалось выше, и при Именно об этом и пойдет речь дальше.
Каковы особенности?
Эритроциты содержат антигены типа А и В. Они связываются с антителами ά и β соответственно. Группы крови и реакции агглютинации:
- 1, 0 (ά, β) - отсутствуют антигены на поверхности эритроцитов;
- 2, А (β) - присутствует антиген А и антитело β;
- 3, В (ά) - содержится антиген В и антитело ά;
- 4, АВ (00) - присутствуют два антигена, антитела отсутствуют.
Стоит отметить, что антигены уже наблюдаются у эмбриона. Что касается антител, они появляются после рождения, на первом месяце жизни.
От группы крови зависит совместимость людей. В этом и состоит причина отторжения плода организмом матери. Другими словами, у нее присутствуют антитела к антигенам крови будущего ребенка. В этом случае возникает несовместимость. Кроме того, группа крови обязательно учитывается при переливании.
Подготовка
Группы крови и реакции агглютинации — совместимые понятия, которые зачастую используются в медицине.
Перед тестом важно придерживаться определенных инструкций. Следует на время исключить употребление некоторых продуктов и лекарственных препаратов. Это поможет сделать результаты более точными. Рекомендации, которых нужно придерживаться, назначает врач. Дело в том, что у разных лабораторий могут не совпадать диапазоны полученных значений, то есть они немного отличаются.
Условия для проведения теста
Чтобы группа крови была определена точно, важно подобрать правильное оснащение. К таковому относятся:
- и пипетка;
- стеклянные палочки;
- стандартные изогемагглютинирующие сыворотки;
- сухие фаянсовые тарелки, которые разделены на 4 сектора.
Существуют требования и к условиям проведения теста:
- дневное освещение;
- температура в помещении выше +16 ˚С;
- использование объемов крови и сыворотки в соотношении 1:10;
- достоверные результаты получаются в течение 5 минут.
Выше представлены основные условия и инструменты. Агглютинация крови может проводиться несколькими способами, и каждый из них выдвигает индивидуальные требования.
Методы
Возможные методы определения группы крови с помощью агглютинации:
- стандартный метод;
- перекрестная реакция;
- использование цоликлонов;
- экспресс-методика с применением набора «Эритротест-группокарт».
Стандартный метод
Агглютинация крови проявляется с использованием эритроцитов пациента. Также применяются стандартные сыворотки, которые содержат известные антигены.
На плоскую тарелку размещается по 1 капле четырех сывороток. Затем с помощью стеклянных палочек на нее вносится кровь пациента, подлежащая исследованию. В данном случае удобно использовать глазные пипетки. Следует придерживаться соотношения 1:10. Сыворотка и кровь осторожно перемешивается. В течение пяти минут можно проводить оценку.
Расшифровка результатов теста простым методом
По истечении указанного времени в каплях сыворотки наблюдается просветление. В некоторых можно увидеть, что агглютинация эритроцитов произошла (мелкие хлопья), в других она отсутствует.
Существуют следующие варианты:
- реакции нет во всех пробах сывороток − 1 группа;
- свертывание произошло везде, кроме 2 пробы - 2 группа;
- отсутствие реакции только в 3 пробе - 3 группа;
- агглютинация произошла везде - 4 группа.
Таким образом, главное — правильно распределить сыворотки. Тогда расшифровать результат не составит труда. Если агглютинация крови проявляется слабо, рекомендуется провести анализ повторно. В случае с мелкими хлопьями их рассматривают под микроскопом.
Перекрестная реакция
Иногда простым способом невозможно точное определение группы крови. Агглютинация в таком случае проводится с помощью метода перекрестной реакции. В отличие от первого варианта теста, важное значение здесь имеют стандартные эритроциты. Кровь пациента набирается в пробирку, центрифугируется, а затем пипеткой откачивается сыворотка для дальнейших исследований.
Она в количестве 2 капель помещается на тарелку, потом в нее добавляются стандартные эритроциты групп А и В. Содержимое размешивается путем покачивания емкости.
Результаты метода перекрестной реакции
Через пять минут пробы готовы к рассмотрению. Варианты такие:
- склеивание произошло в обеих каплях - 1 группа;
- хлопья не наблюдаются ни в одной из проб - 4 группа;
- процесс виден в одном образце - 2 или 3 группа (в зависимости от того, где именно свернулась кровь).
Метод с использованием цоликлонов
Для определения группы крови агглютинация таким способом проводится с применением синтетических заменителей сывороток. Они называются цоликлонами. В них содержатся искусственные заменители ά и β-агглютинов, известных как эритротесты (розового и синего цвета соответственно). Реакция происходит между ними и эритроцитами крови пациента.
Такой метод является самым точным и надежным. В основном он не требует повторного проведения исследования. Оценка результатов осуществляется аналогичным образом, как в случае стандартного метода. Особенность состоит в том, что должна обязательно быть подтверждена реакцией со специфическим синтетическим заменителем (анти-АВ). Кроме того, в ней не наблюдается склеивание при добавлении раствора хлорида натрия.
Экспресс-методика с набором «Эритротест-группокарт»
Рассматривая возможные методы анализа при определении группы крови, стоит отметить, что данный способ имеет свои особенности. Они заключаются в том, что результат можно оценить не только в лаборатории, но и в полевых условиях. Для проведения исследования используется специальный набор. Он включает в себя карточку с лунками, на дне которых уже присутствуют высушенные реагенты. Помимо анти-АВ, анти-А и анти-В, применяется анти-D, позволяющий определить резус-фактор.
Этот метод не требует особой подготовки, разрешено использовать кровь, которая взята из пальца, допускается наличие в ней консервантов. Сначала необходимо внести в каждую лунку по капле воды, чтобы растворить ингредиенты. После этого добавляется кровь, слегка размешивается. Через три минуты будет получен результат.
Ложная агглютинация
Иногда данные, полученные после проведения теста, не соответствуют действительности. Такое явление зависит от определенных факторов.
Выделяют три вида ложной реакции:
Псевдоагглютинация. Истинное склеивание не происходит, эритроциты просто складываются в виде монетных столбиков. Если добавить пару капель физиологического раствора, они распадаются. Подобное явление распознается под микроскопом.
Холодная агглютинация крови. Такая реакция наблюдается в том случае, если условия для проведения исследования были неблагоприятными. Когда температура ниже +16 ˚С, может проявляться склеивание.
Панагглютинация. При наличии инфекции в крови результаты тестов могут быть ложными. Такое явление также возможно в случае с онкологическими заболеваниями, при сепсисе.
Агглютинация очень важна в медицине. Она позволяет не только определять группу крови, но и выявлять возбудителя заболеваний, а также наличие инфекций. Главное, придерживаться рекомендаций врача при подготовке к данной процедуре. Что касается медицинского персонала, его задача состоит в создании благоприятных условий и соблюдении всех правил. Только таким образом можно добиться точных результатов при выполнении агглютинации крови.
Реакция агглютинации основана на специфическом взаимодействии антител (агглютининов) с целыми микробными или другими клетками. В результате такого взаимодействия образуются частицы-агломераты, выпадающие в осадок (агглютинат). В реакции агглютинации могут участвовать бактерии, простейшие, грибы, дрожжи, риккетсии, эритроциты и другие клетки, как живые, так и убитые. Протекает реакция в две фазы: первая — специфическое соединение антигена и антитела, вторая — кеспецифическая, т. е. образование видимого агглютината. Выпадение агглютината происходит в присутствии электролитов, например хлорида натрия. Находящиеся в агглютинате микроорганизмы остаются живыми, но теряют подвижность.
Реакцию агглютинации широко применяют для серо-логической диагностики инфекционных заболеваний и определения антигенной структуры выделенных микробов. Для установления антигенной структуры возбудителя, выделенного из организма больного или носителя, используют специфическую иммунную сыворотку, полученную иммунизацией животных (кролика, осла, барана) определенными микроорганизмами. Идентификацию микроба проводят в реакции агглютинации на стекле с адсорбированными или монорецепторными сыворотками или в пробирках с видовыми агглютинирующими сыворотками. Адсорбированные сыворотки содержат антитела только к специфическим для данного микроба антигенам, а монорецепторные — только к одному специфическому антигену возбудителя.
Видовые сыворотки содержат антитела ко всем антигенам определенного микроба.
Принадлежность выделенной культуры микроорганизма к данному виду определяется при агглютинации его известной сывороткой до титра антител, указанного на этикетке ампулы с сывороткой. Титром антител сыворотки считают последнее разведение ее, в котором еще наблюдается агглютинация культуры микробов, использованных для иммунизации животного. Адсорбированные и монорецепторные сыворотки используют обычно в реакции агглютинации на стекле неразведенными.
При.определении наличия антител в сыворотке крови больного ее разводят изотоническим раствором хлорида натрия начиная с разведения 1: 50 до 1: 800 или более. В каждое разведение добавляют взвесь живых или убитых микробов. Препараты, содержащие микробы, убитые нагреванием или формалином, называют диагностикумами. Диагностикумы, полученные путем прогревания культур микроорганизмов, содержат только соматические антигены. При использовании только формалина у микробов сохраняются и жгутиковые антигены.
При наличии антител в крови больного происходит склеивание взятого в реакцию диагностикума и образование осадка (агглютината) на две пробирки. В этом случае результаты реакции агглютинации расценивают как положительные. В контрольной пробирке, куда вносят изотонический раствор хлорида натрия и диагностикум, взвесь микробов должна быть гомогенной (отрицательная реакция агглютинации).
Учет результатов реакции агглютинации при некоторых заболеваниях, например лептоспирозе, проводят только микроскопически в темном поле зрения микроскопа (микроагглютинация). Для постановки серологического диагноза заболевания учитывают диагностический заболевание. Обычно он соответствует разведению сыворотки 1: 100 или 1: 200.
Антитела в сыворотке крови больного с помощью реакции агглютинации можно выявить при заболевании брюшным тифом и паратифах (реакция Видаля), бруцеллезе (реакция Райта), туляремии и др.
Реакция Кастеллани. При некоторых инфекционных заболеваниях или иммунизации микроорганизмами, имеющими в своем составе групповые антигены, в сыворотке крови, помимо специфических для данного вида антител, появляются еще и групповые. В этом случае родственные виды бактерий будут агглютинироваться полученными сыворотками.
Кастеллани предложил метод адсорбции групповых антител из иммунных сывороток, основанный на удалении их с помощью микроорганизмов родственных видов, которые имеют групповые антигены, но лишены специфических. Культура таких микроорганизмов, добавленная в сыворотку, адсорбирует неспецифические групповые антитела, и после удаления комплекса антиген — антитело с помощью центрифугирования в сыворотке остаются только специфические иммуноглобулины. Сыворотки, обработанные по методу Кастеллани, могут быть использованы в реакции агглютинации как высокоспецифичные.
